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PCR在医学检验中的应用 聚合酶链反应(PCR)

李助教   泸县人民医院
肿瘤 肝炎 感染性疾病
PCR在医学检验中的应用 聚合酶链反应(PCR),是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法,又称多聚酶链反应、无细胞克隆技术等。PCR技术主要由高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复的循环构成,是在一种特异耐热酶-TaDNA聚合酶的催化下完成的由DNA聚合酶的催化反应。以PCR为代表的各种扩增技术的出现使我们进入了基因诊断的新时代。目前,全世界利用PCR技术诊断感染性疾病每年达几千万人次。美国临床检验委员会和国际临床化学学会分别于1995年和1998年颁布了关于分子扩增在临床诊断中应用的质量评估文件等准则文件,后者还对PCR操作的各个环节进行了详细评论,获得两个权威性文件的肯定,可见PCR技术在医学检验方面的重要性。 目前,PCR已广泛应用于寄生虫学、微生物学、肿瘤学、遗传学、免疫学、基因治疗、食品检测、出入境检验检疫等诸多领域。在医学检验工作中,PCR技术的应用,即可保证样品检测的准确性和可靠性,又可节省大量的人力、物力和财力,有巨大的社会和经济效应,具有推广应用价值。传统的PCR技术既费时、费力,其间的污染环节多,容易出现假阳性或假阴性结果。为克服常规PCR检测技术的不足,人们一直在对传统的PCR技术进行改进,已发展有多重PCR、实时定量PCR技术、巢式PCR、PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)、链置换扩增技术、连接酶链式反应(ligase chain reaction, LCR)等,与传统的培养鉴定、免疫测定相比具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。石伟先等通过实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法在甲型流感病毒检测中的临床应用比较的结论是实时荧光PCR法灵敏度、特异性高,适于确诊。Skladal等用经过寡核苷酸探针修饰的电压传感器检测血清中的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)实时监测其DNA结构转录及PCR扩增过程,整个检测过程仅需10min。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)的地方。随着人类基因组计划(human genome project, HGP)的逐步实施及分子生物学科的迅猛发展,越来越多的动植物、微生物基因组序列清楚地呈现在人类面前,基因序列技术正以前所未有的速度迅猛发展。但是对如此众多的基因在生命过程中的功能,如何进行研究就成了全世界生命科学工作者共同研究的课题。为此,建立了新型杂交技术和基因测序方法以便高效、快速地检测分析大量的遗传信息。 二、分子生物传感器在医学检验中的应用 传感器是将传感技术与分子生物诊断技术相结合而形成的一门新技术。分子生物传感器是利用一定的生物或化学的固定技术,将生物识别元
发布于 19-02-19 05:55

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